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植物組織培養(yǎng)技術(shù)
用于組織培養(yǎng)的植物組織的制備是在無菌條件下,由層流柜提供的HEPA過濾空氣中進(jìn)行的。
將組織在無菌容器中培養(yǎng),例如培養(yǎng)皿中的陪替氏培養(yǎng)皿或燒瓶中,其溫度和光強(qiáng)度均受控。
來自環(huán)境的活植物材料在其表面(有時是內(nèi)部)上自然受到了微生物的污染,因此在獲取合適的樣品(稱為外植體)之前,應(yīng)先用化學(xué)溶液(通常是酒精,次氯酸鈉或次氯酸鈣)對它們的表面進(jìn)行滅菌處理。
然后通常將無菌外植體置于無菌固體培養(yǎng)基的表面上,但有時直接置于無菌液體培養(yǎng)基中,特別是在需要細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時。
固體和液體介質(zhì)通常由無機(jī)鹽加上一些有機(jī)營養(yǎng)素,維生素和植物激素組成。固體培養(yǎng)基是從液體培養(yǎng)基中加入膠凝劑(通常是純化的瓊脂)制成的。
培養(yǎng)基的成分,特別是植物激素和氮源(硝酸鹽對銨鹽或氨基酸)對從初始外植體生長的組織的形態(tài)具有深遠(yuǎn)的影響。
例如,過量的生長素通常會導(dǎo)致根部增殖,而過量的細(xì)胞分裂素可能會產(chǎn)生芽。
生長素和細(xì)胞分裂素的平衡通常會產(chǎn)生無組織的細(xì)胞或愈傷組織生長,但是生長的形態(tài)將取決于植物種類以及培養(yǎng)基組成。
隨著培養(yǎng)物的生長,通常將切片切成薄片,然后將其繼代培養(yǎng)到新的培養(yǎng)基上,以使其生長或改變培養(yǎng)物的形態(tài)。組織培養(yǎng)者的技能和經(jīng)驗對于判斷培養(yǎng)的碎片和丟棄的碎片很重要。
當(dāng)芽從培養(yǎng)物中出來時,可以將它們切成薄片并與生長素生根,以產(chǎn)生小植株,當(dāng)小植株成熟時,可以將其轉(zhuǎn)移到盆栽土壤中,以作為普通植物在溫室中進(jìn)一步生長。
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