一、臨床細(xì)菌室開展厭氧細(xì)菌培養(yǎng)的必要性。 

  1．厭氧菌感染的廣泛性：厭氧菌是一大群在無氧環(huán)境下生長的細(xì)菌。厭氧細(xì)菌學(xué)是研究微觀生態(tài)平衡、失調(diào)和調(diào)整的重要部分，在消化道菌群中，99.9%以上為厭氧菌，組成了重要的膜菌群，在生物拮抗、營養(yǎng)、免疫等方面具有不可估量的生理意義。 

近10年來，無芽胞厭氧桿菌及球菌是細(xì)菌性感染的重要原因之一，當(dāng)深部膿腫、敗血癥等常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢查陰性時，往往源于厭氧菌感染。厭氧菌感染是一種內(nèi)源性感染，病種遍及臨床各科，人體的各個部位，各種器官均可發(fā)生厭氧菌感染。據(jù)廣獻(xiàn)報道。在菌血癥中有10%可檢出厭氧菌，在牙源性口面部感染病例中有94%，在吸入性肺炎及肺膿腫時有93%，在婦產(chǎn)科各種感染性疾病中有100%，直腸周圍膿腫有77%可檢出厭氧菌，而且有相當(dāng)一部分病例是單一的厭氧菌感染。 

  2．厭氧菌感染在診斷和治療上的特殊性：檢出厭氧菌須具備必要的條件，如有特殊的厭氧培養(yǎng)系列，包括特殊采樣方式、培養(yǎng)基、鑒定試劑及設(shè)備等。一旦確診厭氧菌感染，在治療也有其特殊性。 

  臨床常用的氨基糖苷類抗生素，磺胺類藥物對厭氧菌無效。脆弱類桿菌由于產(chǎn)生β內(nèi)酰胺酶可對青霉素、頭孢菌類β內(nèi)酰胺抗生素耐藥。為了有效控制臨床感染性疾病，shou先必須明確感染源，是需氧菌還是厭氧菌，因此臨床細(xì)菌室有必要把厭氧菌培養(yǎng)作為常規(guī)細(xì)菌檢驗。 

二、臨床細(xì)菌室開展厭氧菌培養(yǎng)現(xiàn)狀 

  1． 根據(jù)我室1997-2001年調(diào)查結(jié)果表明：我G100家臨床細(xì)菌室開展厭氧 菌培養(yǎng)的情況：從未開展厭氧菌培養(yǎng)的占77%，未作為常規(guī)項目的占10%，不規(guī)范開展的占8%，能作為常規(guī)項目，并規(guī)范開展的僅占5%。 

  2． 我G厭氧菌培養(yǎng)設(shè)備病狀：約95%以上的細(xì)菌室沒有厭氧手套箱，在能開展厭氧菌培養(yǎng)的實驗室中約98%實驗室用厭氧缺罐作為厭氧檢測設(shè)備。極個別的實驗室具備用氣相色譜儀鑒定菌種。有90%實驗室無鑒定厭氧菌的設(shè)備。幾乎所有臨床細(xì)菌室均不開展厭氧菌藥敏試驗。 

  3． 采樣方式：采樣應(yīng)規(guī)范、正確。但有些實驗室用新鮮羊血瓊脂代替厭氧培養(yǎng)基；用注射器作為厭氧菌輸送厭氧培養(yǎng)標(biāo)本的工具。這種操作模式，從標(biāo)本離開人體到厭氧環(huán)境可能會使70%-80%的厭氧菌已不能存活。建議應(yīng)盡量采納床邊采樣方式，或用厭氧輸送培養(yǎng)基，解決標(biāo)本不能立即送檢的問題。有自動血培養(yǎng)分析儀的實驗室，應(yīng)充分利用設(shè)備中厭氧血培養(yǎng)瓶檢測血液、濃液等無菌體液中的厭氧菌，但應(yīng)注意勿將注射器中的氣體注入瓶內(nèi)。 

三、臨床細(xì)菌室開展厭氧培養(yǎng)的可行性 

  1． 臨床醫(yī)生已認(rèn)識到厭氧菌在感染性疾病的重要性，能認(rèn)真采樣和送檢，并能識別厭氧菌感染的重要特征，如感染局部產(chǎn)生氣體，分泌物有惡臭、帶血或呈黑色，感染部位在肛門、口腔、鼻竇、咽頰等粘膜周圍；有菌血癥表現(xiàn)，但細(xì)菌培養(yǎng)陰性，長期使用氨基糖甙類抗生素?zé)o效者。 

  2． 臨床醫(yī)生一般希望通過細(xì)菌檢驗報告盡快證實有無厭氧菌感染，而不是某一種菌，因此，每個實驗室應(yīng)加強厭氧菌的分離，再根據(jù)條件建立簡易鑒定流程或復(fù)雜流程；或以涂片方式報告，如革蘭陽性厭氧球菌、厭氧桿菌；革蘭陰性厭氧桿菌、厭氧球菌。有條件的實驗室可在耐氧試驗陽性的菌株中進(jìn)一步鑒定，以確定菌種類型。 

  3． 厭氧菌培養(yǎng)分離、鑒定，試劑的商品化，減輕了實驗室準(zhǔn)備試劑的負(fù)擔(dān)。如價廉、簡易的厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)，厭氧盒為600-1000元/個；可靠的厭氧鑒定系統(tǒng)如API、VITEK及其他細(xì)菌鑒定系統(tǒng)均具有厭氧菌鑒定功能。自動化血培養(yǎng)分析系統(tǒng)均有厭氧血培養(yǎng)瓶，便于血、胸腹水等無菌體液的厭氧菌培養(yǎng)。 

  4． 美G臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會已推薦出可作為厭氧菌藥敏試驗的方法，如濃度梯度（Etest）法、瓊脂稀釋法等。當(dāng)用常規(guī)厭氧菌藥物治療無效時，可做藥敏試驗，用于糾正原有方案。 

四、臨床細(xì)菌室要不斷完善，以適應(yīng)臨床需要 

  1． 臨床細(xì)菌室工作人員要提高對厭氧細(xì)菌的檢測技術(shù)，要熟悉常見厭氧菌的分類學(xué)及進(jìn)展。要了解厭氧細(xì)菌在人體各部位的正常菌群和常見的厭氧致病菌。要學(xué)習(xí)厭氧培養(yǎng)的新技術(shù)，指導(dǎo)臨床正確采樣和輸送標(biāo)本。 

  2． 厭氧培養(yǎng)的基本條件：（1）標(biāo)本采集及運送：任何標(biāo)本采用床邊連接種均是可取的，不能及時送檢的標(biāo)本，必須立即種入輸送培養(yǎng)基，在允許時間內(nèi)送檢。胸腔、膀胱穿刺液，深部膿腫分泌物。女性殖器后穹隆穿刺物、壞死組織，均可作為厭氧標(biāo)本。但咳出的痰、支氣管分泌物、咽拭子及尿液，均不能作為厭氧菌培養(yǎng)標(biāo)本。糞便標(biāo)本只能用于難辨梭菌培養(yǎng)。（2）厭氧菌培養(yǎng)**的基礎(chǔ)培養(yǎng)基：斯氏瓊脂加5%羊血，適用于所有厭氧菌生長。斯氏血瓊脂加萬古霉素可用于革蘭陰性厭氧細(xì)菌的分離。 

  在進(jìn)行有目標(biāo)性厭氧菌培養(yǎng)時，實驗室可配制幾種選擇性培養(yǎng)基。如阿米卡星、萬古霉素溶血平板，適用于類桿菌屬的分離。阿米卡星膽鹽七葉苷培養(yǎng)基，適用于脆弱類桿菌的分離。難辨梭菌分離培養(yǎng)基用于難辨梭菌的分離。（3）厭氧菌的鑒定，根據(jù)實驗室的條件不同，分別建立1、2、3級的鑒定。1級鑒定可根據(jù)耐氧試驗結(jié)果、革蘭染色反應(yīng)、菌落特點，提供厭氧菌初步推斷報告。2級鑒定根據(jù)革蘭染色、鏡下形態(tài)、菌落特點及傳統(tǒng)生化反應(yīng)初步鑒定到種。3級鑒定采用G際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)化鑒定系統(tǒng)，如API 20 A、MICRO-OID、VITEK-ANI、氣液色譜儀等設(shè)備鑒定。（4）厭氧菌藥敏試驗：厭氧菌感染以經(jīng)驗用藥為主，因為厭氧菌對現(xiàn)已上市的藥物的敏感性有非常合理的預(yù)測性。厭氧菌的藥敏試驗耗時太長（4-6d），因此一般情況下不需要作藥敏試驗。當(dāng)經(jīng)驗用藥無效，或評價一種新的抗厭氧菌藥物，或耐藥監(jiān)測時也需要做藥敏試驗。當(dāng)大批量樣品檢測時，采用瓊脂稀釋法**為理想，但當(dāng)個別菌株需做藥敏試驗時，用Etest法或ATB的ANA試條的方法較為方便。（5）厭氧菌的菌種保存：一般在以下3種情況下需要保存菌株，如疑難菌株的回顧性鑒定，需要用菌株制備生物制品或用于科研的菌株需要長期保存。不同類別厭氧菌保存方法不同，如革蘭陽性芽孢桿菌可用蒸餾水低溫保存。革蘭陽性厭氧球菌或桿菌采用血液低溫保存較好。-40℃以下較為合適，因為在低溫時新陳代謝處于抑制狀態(tài)，不繁殖、不死亡，并且血液在低溫下可形成低氧化還原電勢。冷凍干燥保存菌株適用于所有厭氧菌。 五、厭氧細(xì)菌學(xué)研究進(jìn)展及展望 #p#分頁標(biāo)題#e#

  1．厭氧菌檢測方法學(xué)進(jìn)展，用胞外酶原理設(shè)計的鑒定系統(tǒng)，不需要在厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。厭氧氣體發(fā)生劑的改進(jìn)，不需要在發(fā)生袋中加水，不需要觸酶，大大簡化了操作步驟。全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)的問世，為厭氧菌鑒定創(chuàng)造了更為便利和快捷的條件。 

  2．分子生物學(xué)技術(shù)介入?yún)捬跫?xì)菌學(xué)的研究和檢測，大大縮短了報告時間。對厭氧菌的鑒定由一般表型特征的鑒定深化為遺傳性特征的鑒定。目前聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)已應(yīng)用到臨床，直接從標(biāo)本中檢測厭氧致病菌，應(yīng)用擴增16S核蛋白DNA限制性分析法鑒定放線菌。   在研究厭氧菌的耐藥機理方面，已發(fā)現(xiàn)革蘭陰性厭氧菌如脆弱類桿菌、卟啉單胞菌的孔狀分子結(jié)構(gòu)與其耐藥性有關(guān)，并在真核細(xì)菌和彎曲菌屬中有結(jié)構(gòu)類似的孔狀分子結(jié)構(gòu)，位于細(xì)菌外膜，并了解到這種結(jié)構(gòu)與細(xì)菌膜滲透性下降導(dǎo)致耐藥有關(guān)。 

  展望：雖然實驗科學(xué)的快速發(fā)展推動了厭氧細(xì)菌的研究，但與臨床需要相比還有很大差距，如厭氧菌分離需要時間過長（48-72h）、費用高、開展不普及。今后的任務(wù)shou先要從普及入手，分子生物學(xué)方法要著眼于臨床需要，建立正確便捷的檢測方法，使每一個細(xì)菌室都能開展厭氧菌培養(yǎng)。此外，在基礎(chǔ)理論方面，要深入研究厭氧菌感染的病因、致病因素和免疫機理，從而有效地預(yù)防和治療厭氧菌感染。